生物实验报告观察植物细胞的有丝分裂十二篇

发布时间：2024-12-03 热度：94

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生物实验报告观察植物细胞的有丝分裂

第一篇生物实验报告观察植物细胞的有丝分裂600字

一、实验目的

1.观察植物细胞有丝分裂的过程，识别有丝分裂的不同时期。

2.初步掌握制作洋葱根尖有丝分裂装片的技能。

3.初步掌握绘制生物图的方法。

二、实验原理

在植物体中，有丝分裂常见于根尖、茎尖等分生区细胞，高等植物细胞有丝分裂的过

程，分为分裂间期和分裂期的前期、中期、后期、末期。可以用高倍显微镜观察植物细胞的

有丝分裂的过程，根据各个时期细胞内染色体（或染色质）的变化情况，识别该细胞处于有

丝分裂的哪个时期，细胞核内的染色体容易被碱性染料着色。

三、材料用具

洋葱根尖、显微镜、载玻片、盖玻片、滴管、镊子、培养皿、铅笔、质量分数为15%的盐酸、

体积分数为95%的酒精、质量分数为0.01g/ml的龙胆紫（或紫药水）

四、实验过程（见书Ｐ39）

1．洋葱根尖的培养（提前3—4天）

2．解离：5min

3．漂洗: 10min

4．染色: 5min

5．制片

6．镜检

五、注意

1．解离充分是实验成功的必备条件。解离充分，组织才能分散，细胞也不会重叠。

2 ．漂洗时间一定要足够，否则细胞染不上色。

3 ．染色时，染液的浓度和染色时间必须掌握好。特别是染色不能过深，否则镜下一片紫色，无法观察。

六、讨论

1．制作好洋葱根尖有丝分裂装片的关键是什么？谈谈你自己的体会。

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2．在观察清楚有丝分裂各个时期的细胞以后，绘出洋葱根尖细胞有丝分裂的简图，并标明时期。

第二篇生物化学实验报告册3050字

生物化学实验报告册范文

一、实验室规则

1．实验前应认真预习实验指导，明确实验目的和要求，写出预实验报告。

2．进入实验室必须穿白大衣。严格遵守实验课纪律，不得无故迟到或早退。不得高声说话。严禁拿实验器具开玩笑。实验室内禁止吸烟、用餐。

3．严格按操作规程进行实验。实验过程中自己不能解决或决定的问题，切勿盲目处理，应及时请教指导老师。

4．严格按操作规程使用仪器，凡不熟悉操作方法的仪器不得随意动用，对贵重的精密仪器必须先熟知使用方法，才能开始使用；仪器发生故障，应立即关闭电源并报告老师，不得擅自拆修。

5．取用试剂时必须“随开随盖”，“盖随瓶走”，即用毕立即盖好放回原处，切忌“张冠李戴”，避免污染。

6．爱护公物，节约水、电、试剂，遵守损坏仪器报告、登记、赔偿制度。

7．注意水、电、试剂的使用安全。使用易燃易爆物品时应远离火源。用试管加热时，管口不准对人。严防强酸强碱及有毒物质吸入口内或溅到别人身上。任何时候不得将强酸、强碱、高温、有毒物质抛洒在实验台上。

8．废纸及其它固体废物严禁倒入水槽，应倒到垃圾桶内。废弃液体如为强酸强碱，必须事先用水稀释，方可倒入水槽内，并放水冲走。

9．以实事求是的科学态度如实记录实验结果，仔细分析，做出客观结论。

实验失败，须认真查找原因，而不能任意涂改实验结果。实验完毕，认真书写实验报告，按时上交。

10．实验完毕，个人应将试剂、仪器器材摆放整齐，用过的玻璃器皿应刷洗干净归置好，方可离开实验室。值日生则要认真负责整个实验室的清洁和整理，保持实验整洁卫生。离开实验室前检查电源、水源和门窗的安全等，并严格执行值日生登记制度。

二、实验报告的基本要求

实验报告通过分析总结实验的结果和问题，加深对有关理论和技术的理解与掌握，提高分析、综合、概括问题的能力，同时也是学习撰写研究论文的过程。

1．实验报告应该在专用的生化实验报告本上、按上述格式要求书写。

2．实验报告的前三部分①实验原理、②实验材料（包括实验样品、主要试剂、主要仪器与器材）、③实验步骤（包括实验流程与操作步骤）要求在实验课前预习后撰写，作为实验预习报告的内容。预习时也要考虑并设计好相应实验记录的表格。

3．每项内容的基本要求

（1）实验原理：简明扼要地写出实验的原理，涉及化学反应时用化学反应方程式表示。

（2）实验材料：应包括各种来源的生物样品及试剂和主要仪器。说明化学试剂时要避免使用未被普遍接受的商品名和俗名。试剂要标清所用的浓度。

（3）实验步骤：描述要简洁，不能照抄实验讲义，可以采用工艺流程图的方式或自行设计的表格来表示，但对实验条件和操作的关键环节应写清楚，以便他人重复。

（4）实验记录：包括主要实验条件、实验中观察到的现象及实验中的原始数据。

（5）结果（定量实验包括计算）：应把所得的实验结果（如观察现象）和数据进行整理、归纳、分析、对比，尽量用图表的形式概括实验的结果，如实验组与对照组实验结果的比较表等(有时对实验结果还可附以必要的说明)。

（6）讨论：不应是实验结果的重述，而是以结果为基础的逻辑推论。如对定性实验，在分析实验结果的基础上应有中肯的结论。还可以包括关于实验方法、操作技术和有关实验的一些问题，对实验异常结果的分析和评论，对于实验设计的认识、体会和建议，对实验课的改进意见等。

（7）结论：一般实验要有结论，结论要简单扼要，说明本次实验所获得的结果。

三、实验报告的评分标准（百分制）

1．实验预习报告内容（30分）

学生进入实验室前应预习实验，并书写预习报告。实验预习报告应包括以下三部分： ①实验原理（10分）：要求以自己的语言归纳要点；②实验材料（5分）：包括样品、试剂及仪器。只列出主要仪器、试剂（常规材料不列）；③实验方法（15分）：包括流程或路线、操作步骤，要以流程图、表格式给出要点，简明扼要。依据各部分内容是否完整、清楚、简明等，分以下三个等级给分。

优秀：项目完整，能反映实验者的加工、整理、提炼。

合格：较完整，有一定整理，但不够精炼。

不合格：不完整、缺项，大段文字，完全照抄教材，记流水账。

实验预习报告不合格者，不允许进行实验。该实验应重新预约，待实验室安排时间后方可进行实验。

2．实验记录内容（20分）

实验记录是实验教学、科学研究的重要环节之一，必须培养严谨的科学作风。

实验记录的主要内容包括以下三方面：①主要实验条件（如材料的来源、质量；试剂的规格、用量、浓度；实验时间、操作要点中的技巧、失误等，以便总结实验时进行核对和作为查找成败原因的参考依据）；②实验中观察到的现象（如加入试剂后溶液颜色的变化）；③原始实验数据：设计实验数据表格（注意三线表格式），准确记录实验中测得的原始数据。记录测量值时，要根据仪器的精确度准确记录有效数字（如吸光值为0.050，不应写成0.05），注意有效数字的.位数。

实验记录应在实验过程中书写；应该用钢笔或者圆珠笔记录，不能用铅笔。记录不可擦抹和涂改，写错时可以准确划去重记。记录数据时请教师审核并签名。

实验记录分以下三个等级给分。

优秀：如实详细地记录了实验条件、实验中观察到的现象、结果及实验中的原始数据（如三次测定的吸光度值）等；实验记录用钢笔或者圆珠笔记录，没有抹擦和涂改迹象。书写准确，表格规范（三线表）。有教师的签字审核。

合格：记录了主要实验条件，但不详细、凌乱；实验中观察到的现象不细致；原始数据无涂改迹象，但不规范。有教师的签字审核。

不合格：记录不完整，有遗漏；原始数据有抹擦和涂改迹象、捏造数据（以0分计）；图、表格形式错误；用铅笔记录原始数据；无教师的签字审核。若记录的结果有怀疑、遗漏、丢失，必须重做实验，培养严谨的科学作风。

3．结果与讨论（45分）

（1）数据处理（5分）

对实验中所测得的一系列数值，要选择合适的处理方法进行整理和分析。数据处理时，要根据计算公式正确书写中间计算过程或推导过程及结果，得出最终实验结果。要注意有效数字的位数、单位（国际单位制）。经过统计处理的数据要以_〒sd表示。可分成以下三个等级给分。

优秀：处理方法合理，中间过程清楚，数据格式单位规范。

合格：处理方法较合理，有中间计算过程；数据格式单位较规范。

不合格：处理方法不当；无中间过程；有效数字的位数、单位不规范。

（2）结果（20分）

实验结果部分应把所观察到的现象和处理的最终数据进行归纳、分析、比对，以列表法或作图法来表示。同时对结果还可附以必要的说明。

要注意图表的规范：表格要有编号、标题；表格中数据要有单位（通常列在每一列顶端的第一行或每一行左端的第一列）。图也要有编号、标题，标注在图的下方；直角坐标图的纵轴和横轴要标出方向、名称、单位和长度单位；电泳图谱和层析图谱等要标明正、负极方向及分离出的区带、色带或色斑的组分或成分。电泳结果还要标记泳道，并在图题下给出泳道的注释；要标出分子量标准的各条带的大小。并且注意需要结合图表对结果进行较详细的解释说明。

可分成以下三个等级给分。

优秀：实验结果有归纳、解释说明，结果准确，格式规范。

合格：堆砌实验现象、数据，解释说明少。

不合格：最终实验结果错误且无解释说明，图表、数字不规范。

（3）讨论（20分）

讨论应围绕实验结果进行，不是实验结果的重述，而是以实验结果为基础的逻辑推论，基本内容包括：①用已有的专业知识理论对实验结果进行讨论，从理论上对实验结果的各种资料、数据、现象等进行综合分析、解释，说明实验结果，重点阐述实验中出现的一般规律与特殊性规律之间的关系。

生物化学实验报告册范文

第三篇生物叶绿体中色素的提取和分离实验报告500字

生物《叶绿体中色素的提取和分离》实验报告

一、实验目的

1. 学会提取和分离叶绿体中色素的方法。

2. 比较、观察叶绿体中四种色素：理解它们的特点及与光合作用的`关系

二、实验原理

光合色素主要存在于高等植物叶绿体的基粒片层上，而叶绿体中的色素能溶于有机溶中。故要提取色素，要破坏细胞结构，破坏叶绿体膜，使基粒片层结构直接与有机溶剂接触，使色素溶解在有机溶剂中。叶绿体中的色素有四种，不同色素在层析液(脂溶性强的有机溶剂)中的溶解度不同，因而随层析液的扩散速度也不同。

三、材料用具

取新鲜的绿色叶片、定性滤纸、烧杯、研钵、漏斗、纱布、剪刀、小试管、培养皿、毛细吸管、量筒、有机溶剂、层析液(20份石油醚、2份丙酮、1份苯混合)、二氧化硅、碳酸钙。

四、实验过程(见书p54)

1.提取色素：

2.制备滤纸条：

3.色素分离，纸层析法。(不要让滤液细线触及层析液)

4.观察：

层析后，取出滤纸，在通风处吹干。观察滤纸条上出现色素带的数目、颜色、位置和宽窄。结果是：4条色素带从上而下依次是：胡萝卜素(橙黄色)、叶黄素(黄色)、叶绿素a(蓝绿色)、叶绿素b(黄绿色)。

五、讨论

1.滤纸条上的滤液细线为什么不能接触到层析液？

2.提取和分离叶绿体中色素的关键是什么？

第四篇生物观察植物细胞的质壁分离与复原的实验报告500字

生物《观察植物细胞的质壁分离与复原》的实验报告

一、实验目的

1. 初步学会观察植物细胞质壁分离和复原的方法。

2. 理解植物细胞发生渗透作用的原理。

二、实验原理

当细胞液的浓度小于外界溶液的浓度时，细胞液中的水分就透过原生质层进入外界溶液中，使细胞壁和原生质层都出现一定的.收缩。由于原生质层比细胞壁的收缩性大，当细胞不断失水时，原生质层就会与细胞壁逐渐分离开，也就是分升了质壁分离当细胞液的浓度大于外界溶液的浓度时，外界溶液中的水分就透过原生质层进入细胞液中，整个原生质层就会慢慢地恢复成原来的状态，使植物细胞逐渐发生质壁分离复原。

三、材料用具

紫色洋葱鳞片叶、显微镜、载玻片、盖玻片、滴管、镊子、刀片、吸水纸、清水、0.3g/ml蔗糖溶液

四、实验过程（见书ｐ60）

五、讨论

1．如果将洋葱表皮细胞浸润在与细胞液浓度相同的蔗糖溶液中，这些表皮细胞会出现什么现象？

2．当红细胞细胞膜两侧的溶液具有浓度差时，红细胞会不会发生质壁分离现象？为什么？

3．画一个细胞在正常状态下到经过0.3g/ml蔗糖溶液处理，再经过清水处理的细胞变化的一系列模式图。

第五篇生物实验室述职报告模板1200字

时间过地飞快，忙忙碌碌中又过了一学年，在这一学年里，我一向以一名优秀实验员的标准要求自己，认真学习，努力工作，用心思考，力求在工作、学习上有进步，在教师修养上有提高，争取做一名合格的实验员。

在思想上，热爱祖国，热爱____，坚决拥护党的领导及路线、方针、政策;提高认识，增强紧迫感、时代感、职责感，适应发展要求，强化“六个意识”：第一，强化自我充电意识;第二，强化科研意识;第三，强化信息网络意识;第四，强化合作意识;第五，强化创新意识;第六，强化服务意识。

在工作上，踏实进取、认真谨慎，尽职尽责，对自己负责、对单位负责、树立大局意识、服务意识、使命意识，努力把“全心全意为学校服务”的宗旨体此刻每个细节中;以改善工作作风、讲求工作方法、注重工作效率、提高工作质量为目标，用心努力，较好地完成了全年的各项工作任务。

本学期生物实验室的工作重点仍是为辅助生物理论教学的顺利进行，开展好实验教学。生物实验具备培养学生观察和动手潜力的功能，更有培养学生动脑、启迪思维、开发潜能的作用，现将本学期生物实验工作做如下总结：

一、随着学期工作的结束，实验室的维护与管理工作又将开始，为新学期理论教学工作的顺利开展做好准备，实验室的管理工作是一个不可缺的重要环节，个性是二线为教学服务的管理工作，是较零碎而不大起眼的工作。但是，在管理工作上，仍要将仪器进行科学规范管理。实验室的仪器较多，繁杂。规范的管理可使人看上去就要有一种既科学又舒适的感觉。因此在原有的管理上，除了将仪器进行分门别类分柜，分层放置，仪器贴有标签等外，按照管理和实验的性能，将仪器进一步规范化，这样一来教师使用方便，效率较高。

二、本学期期末仍要做好仪器防锈，防尘，防潮等工作，仪器使用以后防锈工作不可少的，个性是较精密的显微镜等仪器，每使用后，要认真清理和擦试镜头和有关活动的部件，然后装入箱内保存，定期进行检查，发现问题立即采取措施。让所保管的所有仪器几乎无锈、无尘和受潮现象。

三、认真做好仪器的维修工作。每一学期结束前，必须要将仪器进行全面清理和维修，为下学期做好充分准备工作。

四、辅助一线教师提高生物教学效果，优质服务是二线工作人员的职责，也是学校发展的基础。因此在实验管理工作中，除了要熟悉教材，还要掌握分组实验和演示实验与教师任课的大致进度和时间，做好实验的一切准备工作。

五、生物实验室的工作属二线管理工作，在工作中几乎不会有较大的教学成果，工作压力也不会有一线教师的那么大。但是，随着社会的发展，学校的工作也会随着发展和变化。因此在本学期完成任务的前提下，应充分利用余业时间学习专业知识和一些管理常识，不断丰富自己，争取早日像一线教师一样站在最前线努力工作或使自己的管理工作更具特色，为以后的学校的发展做出应有的贡献。

六、按时打扫实验室卫生，确保室内外的整洁。实验室的整洁能够让任课教师和学生的情绪舒坦，是任课教师上课更有效率，学生学习更有激情。

第六篇微生物的染色实验课堂报告1250字

微生物的染色实验课堂报告范文

一、实验题目：

微生物的革兰氏染色

二、实验目的：

1、学习并初步掌握革兰氏染色法；

2、了解革兰氏染色的原理；

3、巩固显微镜的使用。

三、实验原理：

革兰氏染色是1884年丹麦病理学家christain gram氏创立的，是细菌学中最重要的鉴别染色法。染色步骤分为四个部分：

1、初染：加入碱性染料结晶紫固定细菌图片；

2、媒染：加入碘液，碘与结晶紫形成一种不溶于水的复合物；

3、脱色：利用有机溶剂乙醇或丙酮进行脱色；

g-和g+细胞壁的比较：

1、阳性（g+）菌细胞壁特点：细胞壁厚，只有一层，主要由肽聚糖构成，肽聚糖含量高，结构紧密，脂类含量低。当乙醇脱色时，细胞壁肽聚糖层孔径变小，通透性降低，结晶紫和碘的复合物被保留在细胞壁内，复染后仍显紫色（如芽孢杆菌）。

2、阴性（g-）菌细胞壁特点：细胞壁薄，由两层构成，内壁层和外壁层，细胞壁中脂类中脂类物质含量较高，肽聚糖含量较低，网状结构交联程度低，乙醇脱色时溶解了脂类物质，通透性增强，结晶紫与碘的复合物易被乙醇抽提出来，因此，革兰氏阴性菌细胞被脱色，当复染时，脱掉紫色的细胞的细胞壁又着上红色（例如大肠杆菌）。

四、实验器材：

1、菌种：大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌。

2、溶液和试剂：革兰氏染液、草酸铵结晶紫染液、碘液、95%乙醇、番红复染液、水。

3、仪器及其他用品：酒精灯、载玻片、显微镜、接种环、试管架、滤纸、滴管。

五、实验步骤：

1、取一个载玻片，将其洗净并沿一个方向擦拭干净，直至液体不再其上收缩为止；将接种环整平，用灼烧过的接种环在混匀的菌种中取菌，按常规方法图片，应涂大，不宜过厚。

2、打开酒精灯，用火焰固定，不宜烤得太狠，否则菌种呈假阳性。

3、轻旋结晶紫染液滴管，将其旋出，滴加1滴草酸铵结晶紫染液覆盖涂菌部位（轻晃使其完全覆盖），染色40s。

4、染色完成后倾去染液，水洗至流出水为无色。

5、将玻片上残留水用滤纸吸去，待其干燥。

6、在涂菌部位滴加碘液，覆盖1min。

7、媒染完成后，倾去碘液，水洗至流出水无色。

8、将玻片上残留水用滤纸吸去，待其干燥。

9、将载玻片放在白色笔记本上，用滴管滴加95%乙醇脱色，脱色30~40s，不宜脱色太狠，否则菌种呈假阴性。

10、脱色完成后立即用水洗去乙醇。

11、将玻片上残留水用滤纸吸去，待其干燥。

12、滴加番红复染液，染色4min。

13、染色完成后，水洗至流出水无色。

14、吸去残留水并晾干。

15、用显微镜观察并绘图。

用以上步骤完成：大肠杆菌和枯草芽孢杆菌的混合图片染色、大肠杆菌单独菌种染色、金黄色葡萄球菌单独菌种染色。

六、注意事项：

1、选用活跃生长期菌种染色，老龄的'革兰氏阳性细菌会被染成红色而造成假阴性。

2、图片不宜过厚，以免脱色不完全造成假阳性。

3、脱色是革兰氏染色是否成功的关键，脱色不够造成假阳性，脱色过度造成假阴性。

七、实验结果与讨论：

1、结果：

绘出高倍镜下观察的菌体图像。

2、思考题：

（1）写出常见的革兰氏阳性菌与阴性菌，包括致病菌。

（2）革兰氏染色的原理是什么？印象因素有哪些？

（3）如何验证你的染色结果是否正确？

微生物的染色实验课堂报告范文

第七篇生物实验报告观察植物细胞的质壁分离与复原500字

一、实验目的

1. 初步学会观察植物细胞质壁分离和复原的方法。

2. 理解植物细胞发生渗透作用的原理。

二、实验原理

当细胞液的浓度小于外界溶液的浓度时，细胞液中的水分就透过原生质层进入外界溶液中，使细胞壁和原生质层都出现一定的收缩。由于原生质层比细胞壁的收缩性大，当细胞不断失水时，原生质层就会与细胞壁逐渐分离开，也就是分升了质壁分离当细胞液的浓度大于外界溶液的浓度时，外界溶液中的水分就透过原生质层进入细胞液中，整个原生质层就会慢慢地恢复成原来的状态，使植物细胞逐渐发生质壁分离复原。

三、材料用具

紫色洋葱鳞片叶、显微镜、载玻片、盖玻片、滴管、镊子、刀片、吸水纸、清水、0.3g/ml蔗糖溶液

四、实验过程（见书Ｐ60）

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五、讨论

1．如果将洋葱表皮细胞浸润在与细胞液浓度相同的蔗糖溶液中，这些表皮细胞会出现什么现象？

2．当红细胞细胞膜两侧的溶液具有浓度差时，红细胞会不会发生质壁分离现象？为什么？

3．画一个细胞在正常状态下到经过0.3g/ml蔗糖溶液处理，再经过清水处理的细胞变化的一系列模式图。

第八篇初一生物实验报告450字

实验探索淀粉酶对淀粉和蔗糖的水解作用

一、实验目的

1. 初步学会探索酶催化特定化学反应的方法。

2. 探索淀粉酶是否只能催化特定的化学反应。

二、实验原理

淀粉和蔗糖都是非还原糖，它们在酶的催化作用下都能水解成还原糖，还原糖能够与

斐林试剂发生氧化还原反应，生成砖红色的氧化亚铜沉淀。

用淀粉酶分别催化淀粉溶液和蔗糖溶液，再用斐林试剂鉴定溶液中有无还原糖，就可

以看出淀粉酶是否能催化这两种化学反应。

三、材料用具

滴管、试管、火柴、试管架、温度计、三脚架、石棉网、酒精灯、烧杯、质量分数为2%的

新鲜淀粉酶溶液、质量分数为3%的可溶性淀粉溶液、质量分数为3%的蔗糖溶液、斐林试剂

四、实验过程（见书Ｐ47）物理实验报告 ·化学实验报告 ·生物实验报告 ·实验报告格式 ·实验报告模板

五、讨论

1．制备的可溶性淀粉溶液，必须完全冷却后才能使用。为什么？

２．两支试管保温时，为什么要控制在60 ℃左右(低于50 ℃或高于75 ℃)？

3．如果2号试管也产生了砖红色沉淀，可能是由哪些原因造成的？

第九篇生物实验报告比较过氧化氢酶和fe3+的催化效率250字

一、实验目的

1.初步学会探索酶的催化效率的方法。

2.探索过氧化氢酶和Fe3+催化效率的高低。

二、实验原理

新鲜的猪肝中含有过氧化氢酶，Fe3+是一种无机催化剂，它们都可以催化过氧化氢分解

成水和氧

三、材料用具

新鲜的质量分数为20%的猪肝研磨液、滴管、试管、火柴、试管架、质量分数为3.5%的氯化铁溶液、体积分数为3%的过氧化氢溶液。

四、实验过程（见书Ｐ30）您正浏览的文章由()整理，版权归原作者、原出处所有。

五、讨论

实验时为什么要选用新鲜的猪肝？在滴入猪肝研磨液和氯化铁溶液时能否公用一个吸管？为什么？

第十篇高一生物实验报告大全4100字

高一生物实验报告1-4

实验一观察dna和rna在细胞中的分布

实验原理：dna绿色，rna红色

分布：真核生物dna主要分布在细胞核中，线粒体和叶绿体内也含有少量的dna;rna主要分布在细胞质中。

实验结果：细胞核呈绿色，细胞质呈红色。

实验二物质鉴定

还原糖+斐林试剂砖红色沉淀

脂肪+苏丹iii橘黄色

脂肪+苏丹iv红色

蛋白质+双缩脲试剂紫色反应

1、还原糖的检测

(1)材料的选取：还原糖含量高，白色或近于白色，如苹果，梨，白萝卜。

(2)试剂：斐林试剂(甲液：0.1g/ml的naoh溶液，乙液：0.05g/ml的cuso4溶液)，现配现用。

(3)步骤：取样液2ml于试管中→加入刚配的斐林试剂1ml(斐林试剂甲液和乙液等量混合均匀后再加入)→水浴加热2min左右→观察颜色变化(白色→浅蓝色→砖红色)

★模拟尿糖的检测

1、取样：正常人的尿液和糖尿病患者的尿液

2、检测方法：斐林试剂(水浴加热)或班氏试剂或尿糖试纸

3、结果：(用斐林试剂检测)试管内发生出现砖红色沉淀的是糖尿病患者的尿液，未出现砖红色沉淀的是正常人的尿液。

4、分析：因为糖尿病患者的尿液中含有还原糖，与斐林试剂发生反应产生砖红色沉淀，而正常人尿液中无还原糖，所以没有发生反应。

2、脂肪的检测

(1)材料的选取：含脂肪量越高的组织越好，如花生的子叶。

(2)步骤：制作切片(切片越薄越好)将最薄的花生切片放在载玻片中央

染色(滴苏丹ⅲ染液2～3滴切片上→2～3min后吸去染液→滴体积分数50%的酒精洗去浮色→吸去多余的酒精)

制作装片(滴1～2滴清水于材料切片上→盖上盖玻片)

镜检鉴定(显微镜对光→低倍镜观察→高倍镜观察染成橘黄色的脂肪颗粒)

3、蛋白质的检测

(1)试剂：双缩脲试剂(a液：0.1g/ml的naoh溶液，b液：0.01g/ml的cuso4溶液)

(2)步骤：试管中加样液2ml→加双缩脲试剂a液1ml，摇匀→加双缩尿试剂b液4滴，摇匀→观察颜色变化(紫色)

考点提示：

(1)常见还原性糖与非还原性糖有哪些？

葡萄糖、果糖、麦芽糖都是还原性糖;淀粉、蔗糖、纤维素都是非还原性糖。

(2)还原性糖植物组织取材条件？

含糖量较高、颜色为白色或近于白色，如：苹果、梨、白色甘蓝叶、白萝卜等。

(3)研磨中为何要加石英砂？不加石英砂对实验有何影响？

加石英砂是为了使研磨更充分。不加石英砂会使组织样液中还原性糖减少，使鉴定时溶液颜色变化不明显。

(4)斐林试剂甲、乙两液的使用方法？混合的目的？为何要现混现用？

混合后使用;产生氢氧化铜;氢氧化铜不稳定。

(5)还原性糖中加入斐林试剂后，溶液颜色变化的顺序为：浅蓝色棕色砖红色

(6)花生种子切片为何要薄？只有很薄的切片，才能透光，而用于显微镜的观察。

(7)转动细准焦螺旋时，若花生切片的细胞总有一部分清晰，另一部分模糊，其原因一般是什么？切片的厚薄不均匀。

(8)脂肪鉴定中乙醇作用？洗去浮色。

(9)双缩脲试剂a、b两液是否混合后用？先加a液的目的。怎样通过对比看颜色变化？

不能混合;先加a液的目的是使溶液呈碱性;先留出一些大豆组织样液做对比。

实验三观察叶绿体和细胞质流动

1、材料：新鲜藓类叶、黑藻叶或菠菜叶，口腔上皮细胞临时装片

2、原理：叶绿体在显微镜下观察，绿色，球形或椭球形。

用健那绿染液染色后的口腔上皮细胞中线粒体成蓝绿色，细胞质接近无色。

知识概要：

取材制片低倍观察高倍观察

考点提示：

(1)为什么可直接取用藓类的小叶，而不能直接取用菠菜叶？

因为藓类的小叶很薄，只有一层细胞组成，而菠菜叶由很多层细胞构成。

(2)取用菠菜叶的下表皮时，为何要稍带些叶肉？

表皮细胞除保卫细胞外，一般不含叶绿体，而叶肉细胞含较多的叶绿体。

(3)怎样加快黑藻细胞质的流动速度？最适温度是多少？进行光照、提高水温、切伤部分叶片;25℃左右。

(4)对黑藻什么部位的细胞观察，所观察到的细胞质流动的现象最明显？叶脉附近的细胞。

(5)若视野中某细胞中细胞质的流动方向为顺时针，则在装片中该细胞的细胞质的实际流动方向是怎样的？仍为顺时针。

(6)是否一般细胞的细胞质不流动，只有黑藻等少数植物的细胞质才流动？

否，活细胞的细胞质都是流动的。

(7)若观察植物根毛细胞细胞质的流动，则对显微镜的视野亮度应如何调节？

视野应适当调暗一些，可用反光镜的平面镜来采光或缩小光圈。

(8)在强光照射下，叶绿体的向光面有何变化？叶绿体的受光面积较小有一面面向光源实验四观察有丝分裂。

1、材料：洋葱根尖(葱，蒜)

2、步骤：

(一)洋葱根尖的培养

(二)装片的制作

制作流程：解离→漂洗→染色→制片

1.解离：药液：质量分数为15%的盐酸，体积分数为95%的酒精(1：1混合液)。时间：3~5min.目的：使组织中的细胞相互分离开来。

2.漂洗：用清水漂洗约10min.目的：洗去药液，防止解离过度，并有利于染色。

3.染色：用质量浓度为0.01g/ml或0.02g/ml的龙胆紫溶液(或醋酸洋红液)染色3~5min。目的：使染色体着色，利于观察。

4.制片：将根尖放在载玻片上，加一滴清水，并用镊子把根尖弄碎，盖上盖玻片，在盖玻片上再加一片载玻片。然后用拇指轻轻地按压载玻片。目的：使细胞分散开来，有利于观察。

(三)观察

1、先在低倍镜下找到根尖分生区细胞：细胞呈正方形，排列紧密，有的细胞正在分裂。

2、换高倍镜下观察：分裂中期→分裂前、后、末期→分裂间期。(注意各时期细胞内染色体形态和分布的特点)。其中，处于分裂间期的细胞数目最多。

考点提示：

(1)培养根尖时，为何要经常换水？增加水中的氧气，防止根进行无氧呼吸造成根的腐烂。

(2)培养根尖时，应选用老洋葱还是新洋葱？为什么？应选用旧洋葱，因为新洋葱尚在休眠，不易生根。

(3)为何每条根只能用根尖？取根尖的时间是何时？为何？

因为根尖分生区的细胞能进行有丝分裂;上午10时到下午2时;因为此时细胞分裂活跃。

(4)解离和压片的目的分别是什么？压片时为何要再加一块载玻片？解离是为了使细胞相互分离开来，压片是为了使细胞相互分散开来;再加一块载玻片是为了受力均匀，防止盖玻片被压破。

(5)若所观察的组织细胞大多是破碎而不完整的，其原因是什么？压片时用力过大。

(6)解离过程中盐酸的作用是什么？丙酮可代替吗？分解和溶解细胞间质;不能，而硝酸可代替。

(7)为何要漂洗？洗去盐酸便于染色。

(8)细胞中染色最深的结构是什么？染色最深的结构是染色质或染色体。

(9)若所观察的细胞各部分全是紫色，其原因是什么？

染液浓度过大或染色时间过长。

(10)为何要找分生区？分生区的特点是什么？能用高倍物镜找分生区吗？为什么？

因为在根尖只有分生区的细胞能够进行细胞分裂;分生区的特点是：细胞呈正方形，排列紧密，有的细胞处于分裂状态;不能用高倍镜找分生区，因为高倍镜所观察的实际范围很小，难以发现分生区。

(11)分生区细胞中，什么时期的细胞最多？为什么？间期;因为在细胞周期中，间期时间最长。

(12)所观察的细胞能从中期变化到后期吗？为什么？

不能，因为所观察的细胞都是停留在某一时期的死细胞。

(13)观察洋葱表皮细胞能否看到染色体？为什么？不能，因为洋葱表皮细胞一般不分裂。

(14)若观察时不能看到染色体，其原因是什么？

没有找到分生区细胞;没有找到处于分裂期的细胞;染液过稀;染色时间过短。

高一生物实验报告5-9

实验五比较酶和fe3+的催化效率

考点提示：

(1)为何要选新鲜的肝脏？因为在不新鲜的肝脏中，过氧化氢酶的活性会由于细菌的破坏而降低。

(2)该实验中所用试管应选较粗的还是较细的？为什么？应选用较粗的，因为在较细的试管中容易形成大量的气泡，而影响卫生香的复燃。

(3)为何要选动物的肝脏组织来做实验，其他动植物的组织的研磨液能替代吗？因为肝脏组织中过氧化氢酶含量较丰富;其它动植物组织也含有少量的过氧化氢酶，所以能够替代。

(4)相同质量的块状肝脏和肝脏研磨液，哪一个催化效果好？为什么？研磨液效果好;因为它增加过氧化氢酶与过氧化氢的接触面积。

(5)滴入肝脏研磨液和氯化铁溶液时，可否共用下个吸管？为什么？不可共用，防止过氧化氢酶与氯化铁混合，而影响实验效果。

实验六色素的提取和分离

1、原理：叶绿体中的色素能溶解在有机溶剂丙酮或无水乙醇——提取色素

各色素在层析液中的溶解度不同，随层析液在滤纸上扩散速度不同——分离色素

2、步骤：

(1)提取色素研磨

(2)制备滤纸条

(3)画滤液细线：均匀，直，细，重复若干次

(4)分离色素：不能让滤液细线触及层析液

(5)观察和记录：结果滤纸条上从上到下依次为：橙黄色(胡萝卜素)、黄色(叶黄素)、蓝绿色(叶绿素a)、黄绿色(叶绿素b)。

考点提示：

(1)对叶片的要求？为何要去掉叶柄和粗的时脉？绿色、是深绿色。因为叶柄和叶脉中所含色素很少。

(2)二氧化硅的作用？不加二氧化硅对实验有何影响？

为了使研磨充分。不加二氧化硅，会使滤液和色素带的颜色变浅。

(3)丙酮的作用？它可用什么来替代？用水能替代吗？

溶解色素。它可用酒精等有机溶剂来代替，但不能用水来代替，因为色素不溶于水。

(4)碳酸钙的作用？不加碳酸钙对实验有何影响？

保护色素，防止在研磨时叶绿体中的色素受到破坏。不加碳酸钙，滤液会变成黄绿色或褐色。

(5)研磨为何要迅速？要充分？过滤时为何用布不用滤纸？研磨迅速，是为了防止丙酮大量挥发;只有充分研磨，才能使大量色素溶解到丙酮中来。色素不能通过滤纸，但能通过尼龙布。

(6)滤纸条为何要剪去两角？防止两侧层析液扩散过快。

(7)为何不能用钢笔或圆珠笔画线？因为钢笔水或圆珠笔油中含有其它色素，会影响色素的分离结果。

(8)滤液细线为何要直？为何要重画几次？防止色素带的重叠;增加色素量，使色素带的颜色更深一些。

(9)滤液细线为何不能触到层析液？防止色素溶解到层析液中。

(10)滤纸条上色素为何会分离？

由于不同的色素在层析液中的溶解度不同，因而它们随层析液在滤纸条上的扩散速度就不同。

(11)色素带最宽的是什么色素？它在层析液中的溶解度比什么色素大一些？

最宽的色素带是叶绿素a，它的溶解度比叶绿素b大一些。

(12)滤纸条上相互间距的是哪两种色素？胡萝卜素和叶黄素。

(13)色素带最窄的是第几条色素带？为何？

第一条色素带，因为胡萝卜素在叶绿体的四种色素中含量最少。

实验七观察质壁分离和复原

1、条件：细胞内外溶液浓度差，活细胞，大液泡

2、材料：紫色洋葱鳞片叶外表皮细胞(具紫色大液泡)，质量浓度0.3g/ml的蔗糖溶液，清水等。

3、步骤：制作洋葱鳞片叶外表皮细胞临时装片→观察→盖玻片一侧滴蔗糖溶液，另一侧用吸水纸吸引→观察(液泡由大到小，颜色由浅变深，原生质层与细胞壁分离)→盖玻片一侧滴清水，另一侧用吸水纸吸引→观察(质壁分离复原)

4、结论：细胞外溶液浓度>细胞内溶液浓度，细胞失水质壁分离

细胞外溶液浓度<细胞内溶液浓度，细胞吸水质壁分离复原

知识概要：制片观察加液观察加水观察

考点提示：

(1)洋葱为何要选紫色的？若紫色过淡怎么办？

紫色的洋葱有紫色的大液泡，便于观察液泡的大小变化;缩小光圈，使视野变暗些。

(2)洋葱表皮应撕还是削？为何？表皮应撕不能削，因为削的表皮往往太厚。

(3)植物细胞为何会出现质壁分离？动物细胞会吗？当细胞失去水分时，其原生质层的伸缩性大于细胞壁的伸缩性;动物细胞不会发生质壁分离，因为动物细胞没有细胞壁。

(4)质壁分离时，液泡大小和颜色的变化？复原时呢？

细胞发生质壁分离时，液泡变小，紫色加深;当细胞质壁分离复原时，液泡变大，紫色变浅。

(5)若发生质壁分离后的细胞，不能发生质壁分离复原，其原因是什么？

细胞已经死亡(可能是外界溶液浓度过大，细胞失水过多或质壁分离时间过长)

(6)高倍镜使用前，装片如何移动？

若要把视野中上方的物像移到视野的正中心，则要将装片继续向上移动。若要把视野中左方的物像移到视野的正中心，则要将装片继续向左方移动，因为显微镜视野中看到的是倒像。

(7)换高倍物镜后，怎样使物像清晰？视野明暗度会怎样变化？如何调亮？换高倍物镜后，应调节细准焦螺旋使物像变得清晰;视野会变暗，可调大光圈或改用反光镜的凹面镜来使视野变亮。

(8)所用目镜、物镜的长度与放大倍数的关系？目镜越长，放大倍数越小;物镜越长，放大倍数越大。

(9)物像清晰后，物镜与载玻片之间的距离和放大倍数的关系？

物镜与载玻片之间的距离越小，放大倍数越大。

(10)总放大倍数的计算方法？放大倍数具体指面积的放大倍数还是长度的放大倍数？

总放大倍数等于目镜放大倍数与物镜放大倍数的乘积;放大倍数是指细小物体长度或宽度的放大倍数。

(11)放大倍数与视野中细胞大小、多少、视野明暗的关系？

放大倍数越大，视野中细胞越大、数目越少、视野越暗。

(12)更换目镜，若异物消失，则异物在目镜上;更换物镜，若异物消失，则异物在物镜上、移动载玻片，若异物移动，则异物在载玻片上。

(13)怎样利用质壁分离现象来测定植物细胞液的浓度？①配制一系列浓度从小到大的蔗糖溶液②分别用以上不同浓度的溶液制成某植物细胞的临时装片③用显微镜观察某植物细胞是否发生质壁分离。某植物细胞液的浓度就介于不能引起质壁分离的浓度和能引起质壁分离的浓度之间。

实验八dna的粗提取与鉴定

考点提示：

(1)鸡血能用猪血代替吗？为什么？不能，因为哺乳动物的红细胞中没有细胞核，不能提取dna.

(2)鸡血中为何要加柠檬酸钠？为何要弃去鸡血细胞的上清液？

防止血液凝固;因为上清液是血浆，不含细胞和dna.

(3)胀破细胞的方法？能用生理盐水吗？

向血细胞中加入蒸馏水，使细胞大量吸水而胀破;不能用生理盐水，因为血细胞在蒸馏水中不能吸收水分。

(4)该实验中应用玻璃烧杯还是塑料烧杯？为什么？用塑料烧杯，因为玻璃烧杯容易吸附dna.

(5)前后三次过滤时，所用纱布的层数分别是多少？为什么？

第一次用一层纱布，有利于核物质透过纱布进入滤液;第二次用多层纱布，能防止dna丝状物透过纱布进入滤液;第三次用两层纱布，既有利于dna透过纱布，又能防止其它杂质透过纱布。

(6)若实验中所得黏稠物太少，其原因是什么？第一次加蒸馏水过少，细胞未充分胀破;第二次加蒸馏水过多或过少;第一次过滤用了多层纱布;第二次过滤用了一层纱布。

(7)两次加入蒸馏水的目的分别是什么？

第一次是为了使血细胞吸水胀破;第二次是为了降低氯化钠的浓度，有利于dna有析出。

(8)实验中搅拌溶液时，为何总要沿一个方向搅拌？防止dna分子受到损伤。

(9)两次析出dna的方法分别是什么？原理分别是什么？

第一次是加蒸馏水，降低氯化钠的浓度，促使dna析出;第二次是加入冷酒精，因为dna不溶于酒精溶液。

(10)三次溶解dna的液体分别是什么？原理分别是什么？

第一次、第二次都是用浓度为2mol/l的氯化钠溶液，第三次用的是0.015mol/l(或2mol/l)的氯化钠溶液。其原理是dna在氯化钠中的溶解度，是随着氯化钠的浓度的变化而改变的。当氯化钠的物质的量浓度为0.14mol/l时，dna的溶解度最低。2mol/l的氯化钠溶液和0.015mol/l的氯化钠溶液对dna的溶解度都比较高。

(11)鉴定dna时为何要用两支试管？其现象分别是什么？

其中不加dna的试管起对照作用。该试管溶液不变色，另一支加有dna的试管溶液变蓝色。

实验九探究酵母菌的呼吸方式

1、原理：酵母菌在有氧条件下进行有氧呼吸，产生二氧化碳和水：

c6h12o6+6o2+6h2o6→co2+12h2o+能量

在无氧条件下进行无氧呼吸，产生酒精和少量二氧化碳：

c6h12o6→2c2h5oh+2co2+少量能量

2、装置：(见课本)

3、检测：(1)检测co2的产生：使澄清石灰水变浑浊，或使溴麝香草酚蓝水溶液由蓝变绿再变黄。

(2)检测酒精的产生：橙色的重铬酸钾溶液，在酸性条件下与酒精发生反应，变成灰绿色。

高一生物易错知识点

1.使能量持续高效的流向对人类最有意义的部分

2.能量在2个营养级上传递效率在10%—20%

3.单向流动逐级递减

4.真菌ph5.0—6.0细菌ph6.5—7.5放线菌ph7.5—8.5

5.物质作为能量的载体使能量沿食物链食物网流动

6.物质可以循环，能量不可以循环

7.河流受污染后，能够通过物理沉降化学分解微生物分解，很快消除污染

8.生态系统的结构：生态系统的成分+食物链食物网

9.淋巴因子的成分是糖蛋白

病毒衣壳的是1—6多肽分子个

原核细胞的细胞壁：肽聚糖

10.过敏：抗体吸附在皮肤，黏膜，血液中的某些细胞表面，再次进入人体后使细胞释放组织胺等物质.

11.生产者所固定的太阳能总量为流入该食物链的总能量

12.效应b细胞没有识别功能

13.萌发时吸水多少看蛋白质多少

大豆油根瘤菌不用氮肥

脱氨基主要在肝脏但也可以在其他细胞内进行

14.水肿：组织液浓度高于血液

15.尿素是有机物，氨基酸完全氧化分解时产生有机物

16.是否需要转氨基是看身体需不需要

17.蓝藻：原核生物，无质粒

酵母菌：真核生物，有质粒

高尔基体合成纤维素等

trna含chonps

18.生物导弹是单克隆抗体是蛋白质

19.淋巴因子：白细胞介素

第十一篇生物实验报告格式850字

生物实验报告格式

一、实验目的

初步掌握鉴定生物组织中还原糖、脂肪、蛋白质的基本方法。

二、实验原理

1.还原糖的鉴定原理生物组织中普遍存在的还原糖种类较多，常见的有葡萄糖、果糖、麦芽糖。它们的分子内都含有还原性基团(游离醛基或游离酮基)，因此叫做还原糖。蔗糖的分子内没有游离的半缩醛羟基，因此叫做非还原性糖，不具有还原性。本实验中，用斐林试剂只能检验生物组织中还原糖存在与否，而不能鉴定非还原性糖。

斐林试剂由质量浓度为0.1 g/ml的氢氧化钠溶液和质量浓度为0.05 g/ml的硫酸铜溶液配制而成，二者混合后，立即生成淡蓝色的'cu(oh)2沉淀。cu(oh)2与加入的葡萄糖在加热的条件下，能够生成砖红色的cu2o沉淀，而葡萄糖本身则氧化成葡萄糖酸。其反应式如下：

ch2oh—(choh)4—cho+2cu(oh)2→ch2oh—(choh)4—cooh+cu2o↓+2h2o

用斐林试剂鉴定还原糖时，溶液的颜色变化过程为：浅蓝色棕色砖红色(沉淀)。

2.蛋白质的鉴定原理鉴定生物组织中是否含有蛋白质时，常用双缩脲法，使用的是双缩脲试剂。双缩脲试剂的成分是质量浓度为0.1 g/ml的氢氧化钠溶液(a)和质量浓度为0.01 g/ml(b)的硫酸铜溶液。在碱性溶液(naoh)中，双缩脲(h2noc—nh—conh2)能与cu2+作用，形成紫色或紫红色的络合物，这个反应叫做双缩脲反应。由于蛋白质分子中含有很多与双缩脲结构相似的肽键，因此，蛋白质可与双缩脲试剂发生颜色反应。

3.脂肪的鉴定原理脂肪可以被苏丹ⅲ染成橘黄色，被苏丹ⅳ 染成红色

三、实验过程(见书p18)

四、实验用品(见书p18)

五、注意

1.关于鉴定还原糖的实验，在加热试管中的溶液时，应该用试管夹夹住试管上部，并放入盛开水的大烧杯中加热。注意试管底部不要接触烧杯底部，同时试管口不要朝向实验者，以免试管内溶液沸腾时冲出试管，造成烫伤。如果试管内溶液过于沸腾，可以上提试管夹，使试管底部离开大烧杯中的开水。

2.斐林试剂的甲液和乙液混合均匀后方可使用，切勿将甲液和乙液分别加入组织样液中。

3.蛋白质的鉴定中先加双缩脲a，再加双缩脲b

六、讨论

鉴定生物组织中还原糖、脂肪、蛋白质的根据是什么？

生物实验报告格式

第十二篇生物学实验报告4450字

关于生物学实验报告

刘希伟201100140041分子生物学实验报告

质粒dna的提取、纯化及检测

姓名：___学号：2011001400__年级：20__级生物基地班实验日期：2024年9月16日—30日组别：6组同组者：__

一、实验目的

1、掌握碱变性提取法提取大肠杆菌中质粒dna的原理和方法。

2、学习并掌握凝胶电泳进行dna的分离纯化的实验原理。

3、学习并掌握凝胶的制备及电泳方法。

4、学习并掌握凝胶中dna的分离纯化方法。

二、实验原理

1、质粒dna的制备方法

质粒（plasmid）是独立存在于染色体外、能自主复制并能稳定遗传的一种环状双链dna分子，分布于细菌、放线菌、真菌以及一些动植物细胞中，但在细菌细胞中含量最多。细菌质粒大小介于1～200kb之间，是应用最多的质粒类群，在细菌细胞内它们利用宿主细胞的复制机构合成质粒自身的dna。

质粒dna的制备包括3个步骤：①培养细菌，使质粒dna大量扩增；②收集和裂解细菌；③分离和纯化质粒dna。主要方法包括：碱裂解法：0。2molnaoh+1%sds；煮沸裂解法：沸水煮沸40秒；sds裂解法：10%sds，一般用于质粒大量提取。在实际操作中可以根据宿主菌株类型、质粒分子大小、碱基组成和结构等特点以及质粒dna的用途进行选择。本实验选择碱裂解法提取质粒dna。

2、质粒dna的提取——碱变性提取法

在细菌细胞中，染色体dna和质粒dna均被释放出来，但是两者变性与复性所依赖的溶ph值不同。在ph值高达12。0的碱性溶液中，染色体dna的氢键断裂，双螺旋结构解开而变性；共价闭合环状质粒dna的大部分氢键断裂，但两条互补链不完全分离。因为它们在拓扑学上是相互缠绕的。当用ph值4。6的kac（naac）高盐溶液调节碱性溶液至中性时，变性的质粒dna可恢复原来的共价闭合环状超螺旋结构而溶解于溶液中；但染色体dna不能复性，而是与不稳定的大分子rna、蛋白质—sds复合物等一起形成缠连的、可见的白色絮状沉淀。这种沉淀通过离心，与复性的溶于溶液的质粒dna分离。溶于上清液的质粒dna，可用无水乙醇和盐溶液，使之凝聚而形成沉淀。由于dna和rna性质类似，乙醇沉淀

dna的同时，也伴随着rna沉淀，可利用rnasea将rna降解。质粒dna溶液中的rnasea以及一些可溶性蛋白，可通过酚/氯仿抽提除去，最后获得纯度较高的质粒dna。

3、凝胶电泳进行dna分离纯化

电泳（electrophoresis）是带电物质在电场中向着与其电荷相反的电极方向移动的现象。各种生物大分子在一定ph条件下，可以解离成带电荷的离子，在电场中会向相反的电极移动。凝胶是支持电泳介质，它具有分子筛效应。含有电解液的凝胶在电场中，其中的电离子会发生移动，移动的速度可因电离子的大小形态及电荷量的不同而有差异。利用移动速度差异，就可以区别各种大小不同的分子。因而，凝胶电泳可用于分离、鉴定和纯化dna的片段，是分子生物学的核心技术之一。

凝胶电泳技术操作简单而迅速，分辨率高，分辨范围广。此外，凝胶中dna的位置可以用低浓度荧光插入染料如溴化乙锭（ethidium bromide，eb）或sybr gold染色直接观察到，甚至含量少至20pg的双链dna在紫外激发下也能直接检测到。需要的话，这些分离的dna条带可以从凝胶中回收，用于各种各样目的的实验。

分子生物学中，常用的两种凝胶为琼脂糖（agarose）和聚丙烯酰胺凝胶。这两种凝胶能灌制成各种形状、大小和孔径，也能以许多不同的构型和方位进行电泳。聚丙烯酰胺凝胶分辨率高，使用于较小分子核酸（5—500bp）的分离和蛋白质电泳。它的分辨率非常高，长度上相差1bp或质量上相差0。1%的dna都可以彼此分离，这也是采用聚丙烯酰胺凝胶电泳进行dna序列分析的分子基础。虽然它能很快地进行电泳，并能容纳较大的dna上样量，但是与琼脂糖凝胶相比，在制备和操作上繁琐。琼脂糖是从海藻中提取的长链状多聚物，由β—d—吡喃半乳糖与3，6—脱水—l—吡喃半乳糖组成，相对分子质量为104—105。琼脂糖加热至90℃左右，即可溶化形成清亮、透明的液体，浇在模版上冷却后形成凝胶，其凝固点为40—45℃。琼脂糖凝胶相对于聚丙烯酰胺凝胶分辨率低，但它的分离范围更大（50至百万bp），小片段dna（50—20000bp）最适合在恒定轻度和方向的电场中水平方向的琼脂糖凝胶内电泳分离。琼脂糖凝胶电泳易于操作，适用于核酸电泳，测定dna的相对分子质量，分离经限制酶水解的dna的片段，进一步纯化dna等。

琼脂糖凝胶电泳是一种常用的方法。在溶液中，由于核酸有磷酸基而带有负电荷，在电场中向正极移动。dna在琼脂糖凝胶中的电泳迁移率主要取决于6个因素：样品dna分子的大小、dna分子的构象、琼脂糖浓度、电泳所用电场、缓冲液和温度。

三、实验材料

1、实验仪器

培养皿、接种环、三角瓶、酒精灯、恒温振荡培养箱、50ml离心管、1。5ml塑料离心管（eppendorf管）、高速离心机、漩涡振荡器、微量移液器、不同型号枪头、天平、制胶槽、梳子、电泳仪、吸管、量筒、微波炉、灭菌锅、恒温水浴锅、试剂瓶、卫生纸和记号笔、手套等。

2、实验试剂

lb培养基，抗生素ap（氨苄青霉素），溶液ⅰ，溶液ⅱ，溶液ⅲ，rnasea母液，te缓冲液，饱和酚，氯仿/异戊醇混合液，酚/氯仿/异戊醇（pci）混合液，预冷无水乙醇，tae电泳缓冲液（10×），上样缓冲液（6×），琼脂糖，溴化乙锭（eb），dna相对分子质量标准物dna marker λ/hind ⅲ，5mol/l ph 5。2的醋酸钠。

四、实验步骤

1、准备实验

配制lb液体培养基，分装到100ml的三角瓶中20ml，300ml的三角瓶中50ml，另配lb固体培养基；准备1000ul、200ul、10ul移液枪尖各一盒，1。5ml离心管若干于500ml三角瓶中，50ml离心管2个，将上述物品包好连同配好的培养基一同灭菌。

2、菌体培养

在含有ap的lb平板上挑取一环携带有质粒puc19的e。coli dh5单菌落，接种于20mllb液体培养基中进行37℃振荡过夜培养，培养基中加ap100ul

（100ug/ml），质粒puc19具有ap抗性基因，使得带有puc19的质粒得以生长。过夜培养后菌体量大，杂质较多，然后用移液枪吸取过夜培养物2ml转接于50mllb液体培养基中，培养基中加入ap250ul，37℃振荡培养4—6h至对数生长期后期，生长速率快，代谢旺盛，酶系活跃，杂质少，适合提取质粒。

3、质粒提取

（1）称量空的50ml离心管的重量为14。331g，然后将三角瓶中的菌液倒至管中，不能倒满，液面距管口约1cm，7000rpm离心5分钟后弃去上清液，收集菌体细胞。

（2）向离心管中悬滴加入5ml冰预冷的溶液ⅰ打散菌体洗涤，用漩涡振荡器使之充分悬浮后用枪尖吹吸混匀，同步骤（1）离心，弃去上清，将离心管倒置于吸水纸上，使上清液全部流尽干燥，然后称重得14。437g，则菌体质量为106mg。

（3）洗涤后每100mg菌体应加入冰预冷的溶液ⅰ1ml，106mg菌体按100mg菌体处理，加入溶液ⅰ1ml，打散菌泥、吹吸混匀，冰浴5min。溶液ⅰ中的葡萄糖使

溶液密度增加，悬浮后的大肠杆菌不会快速沉积到管子的底部；维持渗透压，防止细胞提前破裂，防止dna受机械剪切力作用而降解。edta是ca2+和mg2+等二价金属离子的螯合剂，可抑制dnase的活性，抑制微生物的生长。tris—cl溶液提供适当的ph。

（4）按比例加入新配制的溶液ⅱ2ml（与溶液ⅰ对应），轻加轻摇，冰浴5min。溶液变清亮透明粘稠如蛋清状。溶液ⅱ中的naoh使细胞膜发生了从bilayer（双层膜）结构向micelle（微囊）结构的相变化导致细胞溶解。同时，强碱性使染色体dna、质粒dna和蛋白质变性；sds为下一步沉淀做铺垫。

（5）按比例加入冰预冷的溶液ⅲ1。5ml（与溶液ⅰ、ⅱ对应），轻加轻摇，冰浴10min。溶液出现白色絮状沉淀。沉淀为蛋白质sds复合物、细胞碎片和其他大分子成分。溶液ⅲ中的hac中和naoh，因为长时间的碱性条件会打断基因组dna，只要是50－100 kb大小的片断，就不能再被pds共沉淀。同时变性的质粒dna复性。反应形成的高盐环境进一步加速了沉淀。

（6）12000rpm离心15min，白色沉淀聚集在离心管一侧，用移液枪将上清液转移到另一洁净的离心管中。然后向上清液中加入1/10体积的3mnaac混匀，加入2倍体积的冰无水乙醇，混匀，—20℃下沉降30分钟。乙醇可以任意比和水相混溶，乙醇与核酸不会起任何化学反应，对dna很安全，因此是理想的沉淀剂。 dna溶液是dna以水合状态稳定存在，当加入乙醇时，乙醇会夺去dna周围的水分子，使dna失水而易于聚合。在ph为8左右的溶液中，dna分子是带负电荷的，加一定浓度的naac或nacl，易于互相聚合而形成dna钠盐沉淀。

（7）以12000rpm离心15min，小心倒去上清液，得到dna沉淀。加入3ml70%冰乙醇，轻轻地覆盖沉淀，不打散沉淀，洗涤一次。

（8）以12000rpm离心5min，离心管底部dna沉淀所在面应与收集沉淀面一致。去掉上清液，将离心管上沉淀部位做好标记，将离心管倒置于吸水纸上，干燥5min。粗提取的质粒呈浅黄色，随着水分的减少质粒变为无色。所以为了完全溶解质粒，要在离心管上标记质粒所在位置。

（9）将dna沉淀溶于1mlte缓冲液中，移液枪吹吸助溶，然后将溶解液转移到一个eppendorf管中。te是ph缓冲液，为dna提供稳定的生理状态，呈弱碱性，有利于保护碱基对。同时含有edta是二价阳离子的螯合剂，抑制dna酶作用。

4、质粒纯化

（1）eppendorf管中加入rnase a（纯浓度＞50ug/ml），37℃保温0。5—1h

（2）将上述的溶液平均分配到2个1。5ml的微量离心管中，每管0。5ml，分别加入与溶液等体积的（500ul）tris饱和苯酚溶液，振荡混匀，7000rpm，离心5min，上清液转移到一洁净的eppendorf管中。苯酚是经tris饱和后的，显黄色。苯

酚加入后，溶液分层，苯酚向下，下层呈浅黄色，上层溶液无色，在中间产生大量白色沉淀，此为变性后的蛋白质。

（3）加入等体积的（500ul）苯酚/氯仿溶液（1：1），振荡混匀， 7000rpm，离心5min，上清液转移到到另一洁净的eppendorf管中。苯酚是强的蛋白变性剂，但是苯酚留在质粒溶液中会影响dna的酶切，它本身易被氧化，会损伤质粒。氯仿也是蛋白变性剂，但是比酚弱，且能溶解质粒中的脂类，溶解苯酚，去除溶液中的苯酚。异戊醇则可起消除抽提过程中出现的泡沫，有利于分层更明显。此时溶液中已看不到明显的白色沉淀，但仍有蛋白质的存在。

（4）加入等体积的氯仿溶液，振荡混匀， 7000rpm，离心5min，上清液转移到一洁净的eppendorf管中，得上清液400ul。

（5）向上清液中加入1/10体积的naac混匀，再加入2倍体积的冰无水乙醇，混匀，—20℃下沉降30分钟。

（6）以12000rpm，离心15min，弃去上清液，得到dna沉淀，为白色。

（7）向dna沉淀中加入70%冰乙醇200ul，不打散沉淀，洗涤。然后以12000rpm离心5min，离心管底部dna沉淀所在面应与收集沉淀面一致。

（8）去掉上清液，将离心管倒置于吸水纸上，室温干燥。用50ulte溶解于1管中。

5、质粒检测

（1）称取0。4g的琼脂糖，置于一锥形瓶中，在三角瓶上标好液面位置，加入40ml的1×tae电泳缓冲液，再加入5—10ml重蒸水，以补充在溶胶过程中损失的水分。然后置微波炉加热至完全溶化，溶液透明。冷却至50℃左右，倒入制板槽制板。

（2）待胶凝固后，小心拔起梳子，使加样孔端置阴极段放进电泳槽内。在槽内加入1×tae 电泳缓冲液，至液面覆盖过胶面2—3cm。取1μl加电泳载样液和3μl质粒样品于小纸片上，用移液枪混匀。

（3）电泳1h，观察溴酚兰的带（蓝色）的移动。

（4）把胶槽取出，小心滑出胶块，放进eb溶液中进行染色，完全浸泡约5min。

（5）凝胶成像仪观察。

五、注意事项